基本信息
標(biāo)準(zhǔn)簡(jiǎn)介
標(biāo)準(zhǔn)目錄
中文樣稿
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National food safety standard - Food nutrition enhancer - Cyanocobalamin
1 Scope
This standard is applicable to cyanocobalamin, a food nutrition enhancer, which is obtained by transformation and crystallization of fermentation broth containing cobalamin produced by microbial fermentation.
2 Molecular formula, structural formula and relative molecular mass
2.1 Molecular formula
C63H88CoN14O14P
2.2 Structural formula
2.3 Relative molecular mass
Cyanocobalamin: 1355.38 (according to the international relative atomic mass in 2018)
3 Technical requirements
3.1 Sensory requirements
Sensory requirements shall meet those specified in Table 1.
Table 1 Sensory requirements
Item Requirement Inspection method
Color and luster Dark red Take a proper amount of sample and put it into a clean and dry white porcelain dish, and observe its color and luster as well as state in natural light
State Crystalline particles or powder
3.2 Physical and chemical indexes
Physical and chemical indexes shall meet those specified in Table 2.
Table 2 Physical and chemical indexes
Item Index Inspection method
Content of cyanocobalamin (calculated by dry basis), ω/% 96.0~102.0 Annex A.4
Loss on drying, ω/% ≤ 12.0 Annex A.5
Related substances, ω/% ≤ 2.0 Annex A.6
Acetone/% ≤ 0.5 Annex A.7
Lead (Pb)/(mg/kg) ≤ 1.0 GB 5009.75 or GB 5009.12
Total arsenic (calculated by As)/(mg/kg) ≤ 1.0 GB5009.76 or GB5009.11
Note: Commercial products of cyanocobalamin (vitamin B12) shall be made of cyanocobalamin meeting the requirements of this standard, and added with necessary food materials and/or food additives as auxiliary materials with the mass, range and dosage meeting the relevant requirements of corresponding national food safety standards.
1 Scope
2 Molecular formula, structural formula and relative molecular mass
3 Technical requirements
Annex A Inspection methods
Annex B Infrared spectrogram of cyanocobalamin standard
Annex C Gas chromatogram of acetone
中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)
GB 1903.43—2020
食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)
食品營(yíng)養(yǎng)強(qiáng)化劑 氰鈷胺
2020-09-11發(fā)布 2021-03-11實(shí)施
中華人民共和國(guó)國(guó)家衛(wèi)生健康委員會(huì)
國(guó)家市場(chǎng)監(jiān)督管理總局
發(fā)布
食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)
食品營(yíng)養(yǎng)強(qiáng)化劑 氰鈷胺
1 范圍
本標(biāo)準(zhǔn)適用于以微生物發(fā)酵生成含鈷胺素的發(fā)酵液，經(jīng)轉(zhuǎn)化和結(jié)晶得到的食品營(yíng)養(yǎng)強(qiáng)化劑氰鈷胺。
2 分子式?結(jié)構(gòu)式和相對(duì)分子質(zhì)量
2.1 分子式
C63H88CoN14O14P
2.2 結(jié)構(gòu)式
2.3 相對(duì)分子質(zhì)量
氰鈷胺：1355.38(按2018年國(guó)際相對(duì)原子質(zhì)量)
3 技術(shù)要求
3.1 感官要求
感官要求應(yīng)符合表1的規(guī)定。
表1 感官要求
項(xiàng)目 要 求 檢驗(yàn)方法
色澤 暗紅色 取適量試樣置于清潔?干燥的白瓷盤中，在自然光線下，觀察其色澤和狀態(tài)
狀態(tài) 結(jié)晶狀顆粒或粉末
3.2 理化指標(biāo)
理化指標(biāo)應(yīng)符合表2的規(guī)定。
表2 理化指標(biāo)
項(xiàng)目 指標(biāo) 檢驗(yàn)方法
氰鈷胺含量(以干基計(jì))，ω/% 96.0~102.0 附錄A.4
干燥減量，ω/% ≤ 12.0 附錄A.5
有關(guān)物質(zhì)，ω/% ≤ 2.0 附錄A.6
丙酮/% ≤ 0.5 附錄A.7
鉛(Pb)/(mg/kg) ≤ 1.0 GB5009.75或GB5009.12
總砷(以As計(jì))/(mg/kg) ≤ 1.0 GB5009.76或GB5009.11
注：商品化的氰鈷胺(維生素B12)產(chǎn)品應(yīng)以符合本標(biāo)準(zhǔn)的氰鈷胺為原料，添加工藝所必需的食品原料和/或食品添加劑作為輔料，其質(zhì)量?范圍和使用量應(yīng)符合相應(yīng)的食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)的規(guī)定。
附 錄 A
檢驗(yàn)方法
A.1 警示
本標(biāo)準(zhǔn)的檢驗(yàn)方法中使用的部分試劑具有毒性或者腐蝕性，操作時(shí)應(yīng)采取適當(dāng)?shù)陌踩头雷o(hù)措施。
A.2 一般規(guī)定
本標(biāo)準(zhǔn)除另有規(guī)定外，所用試劑的純度應(yīng)為分析純，所用標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液?雜質(zhì)測(cè)定用標(biāo)準(zhǔn)溶液?制劑及制品，應(yīng)按GB/T 601?GB/T 602?GB/T 603的規(guī)定制備，實(shí)驗(yàn)用水應(yīng)符合GB/T 6682中三級(jí)水的規(guī)定。試驗(yàn)中所用溶液在未注明用何種溶劑配制時(shí)，均指水溶液。
A.3 鑒別試驗(yàn)
A.3.1 試劑和材料
A.3.1.1 丙酮。
A.3.1.2 三氯甲烷。
A.3.1.3 乙醚。
A.3.1.4 鹽酸。
A.3.1.5 乙酸鈉。
A.3.1.6 溴化鉀。
A.3.1.7 氟化鈉。
A.3.1.8 硫酸氫鉀。
A.3.1.9 次磷酸。
A.3.1.10 酚酞指示劑。
A.3.1.11 乙酸(1mol/L)。
A.3.1.12 氫氧化鈉溶液(100g/L)：稱取10g氫氧化鈉，加水溶解并定容至100mL。
A.3.1.13 氫氧化鈉溶液(20g/L)：稱取1g氫氧化鈉，加水溶解并定容至50mL。
A.3.1.14 1-亞硝基-2-萘酚-3，6-二磺酸鈉溶液(2g/L)：稱取0.1g 1-亞硝基-2-萘酚-3，6-二磺酸鈉，緩緩加水溶解并定容至50mL。
A.3.1.15 硫酸溶液(1+7)：取70mL 水，緩緩注入10mL 硫酸，混勻。
A.3.1.16 硫酸亞鐵銨飽和溶液：稱取42g六水合硫酸亞鐵銨，加水溶解并定容至100mL。
A.3.2 儀器和設(shè)備
A.3.2.1 天平：感量0.0001g。
A.3.2.2 坩堝。
A.3.2.3 蒸餾裝置。
A.3.2.4 紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)。
A.3.2.5 紅外光譜儀。
A.3.3 鑒別方法
A.3.3.1 溶解性
略溶于水和乙醇，不溶于丙酮?三氯甲烷或乙醚。
A.3.3.2 紫外鑒別
準(zhǔn)確稱取30mg試樣于1000 mL 容量瓶中，用水定容至刻度，采用紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)測(cè)定，在吸收譜上應(yīng)出現(xiàn)最大峰278nm±1nm?361nm±1nm 和550nm±2nm。361nm 波長(zhǎng)處的吸光度與278nm 波長(zhǎng)處的吸光度的比值應(yīng)為1.70~1.90。361nm 波長(zhǎng)處的吸光度與550nm 波長(zhǎng)處的吸光度的比值應(yīng)為3.15~3.40。
A.3.3.3 鈷原子鑒別
取約1mg試樣，加硫酸氫鉀約50mg，置坩堝中，灼燒至熔融，放冷，用玻璃棒搗碎，加3 mL 水，煮沸使溶解，加酚酞指示劑1滴，混勻，滴加氫氧化鈉溶液(A.3.1.12)至顯淡紅色后，加500 mg乙酸鈉?0.5mL 乙酸和0.5mL1-亞硝基-2-萘酚-3，6-二磺酸鈉溶液，立即顯現(xiàn)紅色或橙紅色，加鹽酸0.5mL，煮沸1min，顏色應(yīng)不消失。
A.3.3.4 氰離子鑒別
移取約5mg氰鈷胺試樣于盛有5mL 水的50mL 蒸餾燒瓶中，蒸餾燒瓶連接一個(gè)短的?水冷卻的垂直冷凝裝置，冷凝裝置出口端浸入到盛有1mL 氫氧化鈉溶液(A.3.1.13)的測(cè)試管中。樣品溶解于蒸餾燒瓶中后，加入2.5mL 次磷酸，連接好冷凝裝置，緩慢加熱煮沸10 min，收集1 mL 蒸餾液于測(cè)試管中。測(cè)試管中加入4滴冷的?硫酸亞鐵銨飽和溶液，輕搖，加入30 mg氟化鈉，加熱至沸騰，立即加入幾滴硫酸溶液至溶液變澄清，再加入3滴~5滴硫酸溶液，數(shù)分鐘內(nèi)溶液變成藍(lán)色至藍(lán)綠色。
A.3.3.5 紅外鑒別
將溴化鉀壓片試樣的譜圖與氰鈷胺標(biāo)準(zhǔn)品的紅外光譜圖(見(jiàn)附錄B 中圖B.1)比較，兩者應(yīng)基本一致。
A.4 氰鈷胺含量
A.4.1 儀器和設(shè)備
A.4.1.1 天平：感量0.0001g。
A.4.1.2 紫外分光光度計(jì)。
A.4.2 分析步驟
精確稱取約0.025g(精確至0.0001g)干燥試樣于1000mL 容量瓶中，用水溶解并定容至刻度，混勻得到試樣溶液。用紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)測(cè)定。以水作空白，采用1cm 比色皿在361nm 處測(cè)定試樣溶液吸光度值。
A.4.3 結(jié)果計(jì)算
氰鈷胺含量(以干基計(jì))的質(zhì)量分?jǐn)?shù)ω1，按式(A.1)計(jì)算，以%表示。
(A.1)
式中：
A——氰鈷胺紫外吸光值；
207——氰鈷胺的標(biāo)準(zhǔn)百分吸收系數(shù)( )；
V——試樣定容的體積，單位為毫升(mL)；
m——試樣的質(zhì)量(以干基計(jì))，單位為克(g)。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果以平行測(cè)定結(jié)果的算術(shù)平均值為準(zhǔn)，保留一位小數(shù)。
在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值不大于算術(shù)平均值的2.0%。
A.5 干燥減量
A.5.1 方法原理
干燥減量是指試樣在105 ℃±2 ℃溫度下干燥后，失去水分及其他揮發(fā)性物質(zhì)的質(zhì)量與試樣質(zhì)量之比，用百分?jǐn)?shù)表示。
A.5.2 儀器和設(shè)備
A.5.2.1 天平：感量0.0001g。
A.5.2.2 稱量瓶。
A.5.2.3 真空干燥箱。
A.5.3 分析步驟
稱取50mg(精確至0.0001g)試樣，置于已干燥恒重(105℃±2℃，30min)的稱量瓶中。將試樣在稱量瓶中均勻鋪開。在105 ℃±2 ℃?真空壓力低于2.67kPa條件下干燥至恒重。將稱量瓶置于干燥器中冷卻至室溫，稱量。
A.5.4 結(jié)果計(jì)算
試樣干燥減量的質(zhì)量分?jǐn)?shù)ω2，按式(A.2)計(jì)算，以%表示。
(A.2)
式中：
m1——干燥前帶有樣品的稱量瓶的質(zhì)量，單位為克(g)；
m2——干燥后帶有樣品的稱量瓶的質(zhì)量，單位為克(g)；
m0——干燥后稱量瓶的質(zhì)量，單位為克(g)。
計(jì)算結(jié)果保留2位有效數(shù)字。
取平行測(cè)定結(jié)果的算術(shù)平均值為測(cè)定結(jié)果，兩次平行測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值不大于1.0%。
A.6 有關(guān)物質(zhì)
A.6.1 方法原理
試樣用流動(dòng)相溶解后，采用液相色譜儀檢測(cè)，峰面積比較法定量。
A.6.2 試劑和材料
A.6.2.1 氯胺T。
A.6.2.2 甲醇。
A.6.2.3 磷酸氫二鈉。
A.6.2.4 磷酸。
A.6.2.5 鹽酸。
A.6.2.6 磷酸氫二鈉溶液：0.028 mol/L。稱取10.03g 十二水合磷酸氫二鈉，加水溶解并定容至1000mL。
A.6.2.7 鹽酸溶液：0.05mol/L。取4.5mL 鹽酸，加水至1000mL，混勻。
A.6.2.8 氯胺T 溶液：0.1 %。量取0.1g氯胺T，加水溶解并定容至100mL。
A.6.3 儀器和設(shè)備
A.6.3.1 天平：感量0.0001g。
A.6.3.2 高效液相色譜儀：配有紫外檢測(cè)器。
A.6.4 分析步驟
A.6.4.1 試樣溶液：稱取試樣10mg于10mL 容量瓶中，用流動(dòng)相溶解并定容至刻度，混勻。
A.6.4.2 對(duì)照溶液：精密量取1mL 試樣溶液于100mL 量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，混勻。
A.6.4.3 系統(tǒng)適用性溶液：稱取試樣25 mg 于25 mL 容量瓶中，加10 mL 水溶解樣品，加入5 mL0.1% 氯胺T 溶液?0.5mL 0.05mol/L 鹽酸溶液，用水稀釋至刻度，混勻，靜置5 min。準(zhǔn)確量取1 mL上述溶液于10mL 量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，混勻。
A.6.4.4 靈敏度溶液：準(zhǔn)確量取1mL 對(duì)照溶液于10mL 容量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，混勻。
A.6.5 參考色譜條件
A.6.5.1 色譜柱：C18色譜柱(柱長(zhǎng)250mm，內(nèi)徑4.6mm，粒徑5μm)，或其他等效色譜柱。
A.6.5.2 流動(dòng)相：取260mL 甲醇和740mL 磷酸氫二鈉溶液(A.6.2.6)混勻，用磷酸調(diào)節(jié)pH 至3.5。
A.6.5.3 柱溫：25 ℃。
A.6.5.4 檢測(cè)器波長(zhǎng)：361nm。
A.6.5.5 進(jìn)樣量：10μL。
A.6.5.6 運(yùn)行時(shí)間：氰鈷胺主峰保留時(shí)間的3倍。
A.6.6 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)
采用新制備的溶液，且避免強(qiáng)光照射。按照液相色譜儀操作規(guī)程操作，取系統(tǒng)適用性溶液(A.6.4.3)和靈敏度溶液(A.6.4.4)分別注入液相色譜儀中，觀察色譜圖。
系統(tǒng)適用性溶液中應(yīng)出現(xiàn)氰鈷胺峰與一個(gè)降解產(chǎn)物峰(相對(duì)保留時(shí)間約為1.4)，二者的分離度應(yīng)大于2.5，靈敏度溶液中主峰的信噪比應(yīng)大于3。
A.6.7 測(cè)定
系統(tǒng)適用性合格后再進(jìn)行試樣檢測(cè)。依次注入試樣溶液(A.6.4.1)?對(duì)照溶液(A.6.4.2)進(jìn)行測(cè)定。
A.6.8 結(jié)果計(jì)算
試樣中有關(guān)物質(zhì)的含量ω3，按式(A.3)計(jì)算，以%表示。
(A.3)
式中：
A1——試樣溶液除主峰以外的所有雜質(zhì)峰面積之和；
A2——對(duì)照溶液主峰面積。
A.6.9 精密度
在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值不超過(guò)其算術(shù)平均值的10%。
A.7 丙酮
A.7.1 試劑和材料
丙酮：色譜純。
A.7.2 儀器和設(shè)備
A.7.2.1 天平：感量0.001g。
A.7.2.2 氣相色譜儀：配有氫火焰離子化檢測(cè)器(FID)和頂空進(jìn)樣器。
A.7.3 參考色譜條件
A.7.3.1 色譜柱：毛細(xì)管柱(柱長(zhǎng)60m，內(nèi)徑0.32 mm，膜厚1.6μm，固定液為6%氰丙基苯基-94%二甲基聚硅氧烷)，或其他等效色譜柱。
A.7.3.2 載氣：氮?dú)?純度大于99.99%)。
A.7.3.3 載氣流量：1.5mL/min。
A.7.3.4 柱溫：40 ℃保持10min后，以20 ℃/min的速率升溫至240 ℃，保持2min。
A.7.3.5 進(jìn)樣口溫度：140 ℃。
A.7.3.6 檢測(cè)器溫度：250 ℃。
A.7.3.7 檢測(cè)器氣體流量：空氣，400mL/min；氫氣，60mL/min；尾吹氣，25mL/min。
A.7.3.8 進(jìn)樣量：1.0mL。
A.7.3.9 分流比：1∶50。
A.7.4 參考頂空條件
A.7.4.1 頂空瓶平衡溫度：80 ℃。
A.7.4.2 平衡時(shí)間：45min。
A.7.4.3 定量環(huán)溫度：90 ℃。
A.7.4.4 傳輸線溫度：100 ℃。
A.7.5 分析步驟
A.7.5.1 空白溶液制備
移取5.0mL 水，置于頂空瓶中，迅速壓緊瓶蓋。
A.7.5.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液制備
稱取0.1g丙酮(精確至0.001g)于已預(yù)加80mL 水的100 mL 容量瓶中，用水定容至刻度，搖勻，得到1000mg/L 的丙酮標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。吸取適量的丙酮標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液于10 mL 容量瓶中，用水配制成10mg/L?20mg/L?50mg/L?100mg/L?200mg/L 的丙酮標(biāo)準(zhǔn)使用溶液，取上述系列溶液各5.0mL，分別置于頂空瓶中，迅速壓緊瓶蓋。
A.7.5.3 試樣溶液制備
稱取試樣0.1g (精確至0.001g)于10 mL 容量瓶中，用水溶解后定容至刻度，搖勻，得到試樣溶液。移取該溶液5.0mL 置于頂空瓶中，迅速壓緊瓶蓋，備用。
A.7.5.4 測(cè)定
在參考條件下(A.7.3和A.7.4)，分別對(duì)空白溶液?標(biāo)準(zhǔn)系列溶液和試樣溶液進(jìn)行測(cè)定，記錄丙酮的峰面積值。丙酮的氣相色譜圖參見(jiàn)附錄C 中的圖C.1。以標(biāo)準(zhǔn)系列溶液色譜圖中丙酮的峰面積值為Y軸，以對(duì)應(yīng)溶劑濃度(mg/L)為X軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到丙酮標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)試樣溶液色譜圖中丙酮的峰面積值，從標(biāo)準(zhǔn)曲線求得試樣溶液中丙酮的濃度(mg/L)。
A.7.6 結(jié)果計(jì)算
試樣中丙酮的含量ω4，按式(A.4)計(jì)算。
(A.4)
式中：
c——從標(biāo)準(zhǔn)曲線求得的試樣溶液中丙酮的濃度，單位為毫克每升(mg/L)。
V——試樣溶液的體積，單位為毫升(mL)。
m——試樣的質(zhì)量，單位為克(g)。
A.7.7 精密度
在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值不超過(guò)其算術(shù)平均值的10%。
附 錄 B
氰鈷胺標(biāo)準(zhǔn)品紅外光譜圖
氰鈷胺標(biāo)準(zhǔn)品的紅外光譜圖如圖B.1所示。
透過(guò)率/%
波數(shù)/cm-1
圖C.1 氰鈷胺標(biāo)準(zhǔn)品的紅外光譜圖
附 錄 C
丙酮?dú)庀嗌V圖
丙酮的氣相色譜圖如圖C.1所示。
響應(yīng)值/pA
圖C.1 丙酮的氣相色譜圖
