標準編號:	QB/T 2306-1997
中文名稱:	耐高溫α-淀粉酶制劑
英文名稱:	High-temperature Resistant α-amylase Preparation
中標分類:	X60    食品發酵、釀造綜合
行業分類:	QB    輕工行業標準
發布機構:	中國輕工總會
發布日期:	1997-6-20
實施日期:	1998-4-1
標準狀態:	abolished
作廢日期:	2017-05-12
翻譯語言:	英文
文件格式:	PDF
中文字符數:	10000 字
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Thermostable α-amylase preparation 1 Scope This standard specifies the terms and definitions, technical requirements, test method, inspection rules, marking, packaging, transportation and storage requirements of thermostable α-amylase preparation. This standard is applicable to the thermostable α-amylase preparation produced by bacillus licheniformis (or other dissociants) via deep fermentation culture and purification. 2 Normative references The following standards contain provisions which, through reference in this standard, constitute provisions of this standard. At the time of publication, all editions listed are valid. All standards are subject to revision, and parties to agreements based on this standard are encouraged to investigate the possibility of applying the most recent editions of the standards indicated below. GB 601-1988 Chemical reagent - Preparations of standard volumetric solutions GB 4789-1994 Microbiological examination of food hygiene GB/T 5009.11-1996 Method for determination of total arsenic in food GB/T 5009.12-1996 Method for determination of lead in food GB 8451-1987 Method for limit test of heavy metals in food additives QB/T 1803-1993 General methods of determination for industrial enzymes QB/T 1804-1993 General principles of inspection and mark, packing, transport and storage for industrial enzymes 3 Terms and definitions 3.1 thermostable α-amylase α-amylase preparation with higher thermostability, produced by selected bacillus licheniformis via fermentation and purification 3.2 enzyme active unit amount of enzyme required to liquefy 1mg of soluble starch into dextrin in 1min under the condition of 60℃ and pH=6.0, i.e. one enzyme active unit, expressed in u/mL (or u/g) 4 Technical requirements 4.1 Appearance requirements Liquid dosage form: brown liquid with the characteristic odor of the enzyme, allowing a small amount of condensation.

1 Scope 2 Normative references 3 Terms and definitions 4 Technical requirements 5 Test method 6 Inspection rules 7 Marking, packaging, transportation and storage Annex A (Normative)

5 試驗方法 本方法所用的水均為蒸餾水或去離子水，所用試劑在未特殊注明時均為分析純。 5.1 酶活力的測定 5.1.1 分光光度計法(第一法) 5.1.1.1 原理 α-淀粉酶能將淀粉分子鏈中的α-1，4葡萄糖苷鍵隨機切斷成長短不一的短鏈糊精、少量麥芽糖和葡萄糖，而使淀粉對碘呈藍黑色的特異性反應，隨淀粉降解藍色逐漸減褪，漸變成紅棕色，其顏色消失的速度與酶活性有關，故可在標準條件下，通過測定反應后溶液的吸光度計算其酶活力。 5.1.1.2 試劑和溶液 a)原碘液 稱取碘化鉀22.0g溶于約300mL水中，加入碘11.0g，在攪拌下使其溶解，然后移入500mL容量瓶中，用水定容，貯于棕色瓶中備用(每月制備一次)。 b)稀碘液 稱取碘化鉀20.0g溶于約300mL水中，準確加入原碘液2.00mL，全部移入500mL容量瓶中，用水定容，貯于棕色瓶中備用(須當天配制)。 c)20g/L可溶性淀粉1)溶液 注：1)采用浙江菱湖食品化工聯合公司生產的、標有‘專供酶制劑測定'用的字樣和批號的“可溶性淀粉”。 稱取可溶性淀粉(以絕干計)2.0000g，精確至0.0001g，用水調成漿狀物，在攪動下緩緩傾入70mL沸水中，然后，以30mL水分幾次沖洗盛淀粉的小燒杯，洗液并入其中，加熱煮沸2min直至完全透明，冷卻至室溫，全部移入100mL容量瓶，用水稀釋至刻線。此溶液必須當天配制。 d)磷酸緩沖液(pH＝6.0) 稱取磷酸氫二鈉(Na2HPO4·12H2O)45.23g、檸檬酸(C6H8O7·H2O)8.07g，用水溶解并定容至1000mL。配好后，用pH計校正。 e)鹽酸溶液c(HCl)＝0.1mol/L，按GB 601配制。 5.1.1.3 儀器和設備 分光光度計； 恒溫水浴 50℃～100℃精度±0.1℃； 試管 25mm×200mm； 容量瓶； 自動吸管； 秒表。 5.1.1.4 待測酶液的制備 a)液體酶制劑：直接用緩沖液(5.1.1.2d)配制，使最終酶液濃度控制在65～70u/mL范圍內。 b)固體酶制劑：稱取酶粉1～2g，精確至0.0002g，先用少量磷酸緩沖液溶解，并用玻璃攪棒搗研(或用磁力攪拌器攪拌)，直至固體全部溶解(約10～15min)，將上清液小心傾入容量瓶中，沉渣部分再加入少量緩沖液，如此搗研3～4次，最后全部移入容量瓶中，用緩沖液稀釋至刻度(使酶濃度控制在65～70u/mL范圍內)，搖勻。通過四層紗布過濾，收集濾液供測定用。 5.1.1.5 測定 a)吸取可溶性淀粉溶液(5.1.1.2c)20.0mL和緩沖液(5.1.1.2.4)5.0mL于試管中，在70℃恒溫水浴中預熱平衡5min。 b)加入稀釋好的待測酶液(5.1.1.4)1.00mL，立即用秒表記錄時間，搖勻，準確反應5min。 c)立即用自動吸管吸取反應液b)1.00mL，加到預先盛有0.1mol/L鹽酸0.5mL和稀碘液(5.1.1.2b)5.00mL的試管中，搖勻。 d)以0.1mol/L鹽酸0.5mL和稀碘液5.00mL的混合液作試劑空白，于660nm波長下，用10mm比色皿迅速測定其吸光度(A)。根據吸光度查附錄A(標準的附錄)，求得測試酶液的濃度(c)。 5.1.1.6 計算 X＝c×n×16.67 (1) 式中：X——樣品的酶活力，u/mL(u/g)； c——測試酶的濃度，u/mL； n——樣品的稀釋倍數； 16.67——換算常數。 所得結果表示至整數。 5.1.1.7 結果的允許差 平行試驗相對誤差不得超過2％。 5.1.2 目視比色法(第二法) 5.1.2.1 原理 同5.1.1.1。 5.1.2.2 試劑和溶液 a)原碘液 同5.1.1.2a。 b)稀碘液 同5.1.1.2b。 c)20g/L可溶性淀粉溶液 同5.1.1.2c。 d)磷酸緩沖液(pH＝6.0) 同5.1.1.2d。 e)標準終點色溶液： A液：稱取氯化鈷(CoCl2·6H2O)0.2439g和重鉻酸鉀0.4878g，用水溶解定容至500mL。 B液：稱取鉻黑T(C2OH12N3N·O2S)40mg，用水溶解并定容至100mL。 C液(標準終點色溶液：取A液40mL與B液5.0mL充分混勻，備用。此混合液于冰箱中保存，15天后需要重新配制。 5.1.2.3 儀器和設備 恒溫水浴 50～100℃ 精度±0.1℃； 容量瓶； 試管 25mm×200mm； 秒表。 5.1.2.4 分析步驟 待測酶液的制備：按5.1.1.4進行制備，但最終酶液濃度需控制在300～350u/mL范圍內。 吸取標準終點色溶液6mL于試管中，作為比色標準。 吸取20g/L可溶性淀粉溶液20mL和pH6.0的磷酸緩沖溶液5mL置于25mm×200mm試管中，在70℃恒溫水浴中預熱平衡5min，然后加入預先稀釋好的酶液0.5mL，立即用秒表記錄時間，充分搖勻，當反應接近2min時，就開始不時地用吸管取出反應液1.00mL，加到預先盛有稀碘液(5.1.1.2b)5.00mL的試管中，當試管中反應溶液顏色由紫色漸變為紅棕色、恰與標準終點色溶液相同時，即為反應終點，并記錄到達終點所需時間(分鐘)。 酶反應全部時間控制在2～2.5min之內。 5.1.2.5 計算