標準編號:	GB 4789.4-2016
中文名稱:	食品安全國家標準 食品微生物學檢驗 沙門氏菌檢驗
英文名稱:	National food safety standard -Microbiological examination of food-Examination of salmonella
中標分類:	X09    衛生、安全、勞動保護
行業分類:	GB    國家標準
發布機構:	國家衛生和計劃生育委員會 國家食品藥品監督管理總局
發布日期:	2016-12-23
實施日期:	2017-6-23
標準狀態:	superseded
被新標準替代:	GB 4789.4-2024 食品安全國家標準食品 微生物學檢驗 沙門氏菌檢驗
被替代日期:	2024-8-8
作廢日期:	2024-08-08
替代舊標準:	GB 4789.4-2010 食品微生物學檢驗 沙氏門菌檢驗 SN 0170-1992 出口食品沙門氏菌屬包括亞利桑那菌檢驗方法 SN/T 2552.5-2010 乳及乳制品衛生微生物學檢驗方法 第5部分：沙門氏菌檢驗
翻譯語言:	英文
文件格式:	PDF
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1 Scope This standard specifies the examination method for Salmonella in foods. This standard is applicable to the examination of salmonellae in foods. 2 Apparatus and Materials In addition to the apparatuses for conventional sterilization and cultivation in microbiological laboratory, other apparatuses and materials are as follows: 2.1 Refrigerator: 2℃ ~ 5℃. 2.2 Constant temperature incubator: 36℃ ± 1℃, 42℃ ± 1℃. 2.3 Homogenizer. 2.4 Oscillator. 2.5 Electronic balance: sensibility of 0.1g. 2.6 Sterile conical flask: capacity of 500mL and 250mL. 2.7 Sterile pipette: 1mL (scale division of 0.01mL), 10mL (scale division of 0.1mL) or micropipette and pipette tip. 2.8 Sterile culture dish: diameter of 60 mm and 90mm. 2.9 Sterile test tube: 3mm×50mm, 10mm×75mm. 2.10 pH meter or pH colorimetric tube or precise pH paper. 2.11 Full-automatic microbe biochemical identification system. 2.12 Sterile capillary. 3 Culture Media and Reagents 3.1 Buffered peptone water (BPW): see A.1. 3.2 Tetrathionate broth (TTB): see A.2. 3.3 Selenite cystine (SC) broth: see A.3. 3.4 Bismuth sulfite (BS) agar: see A.4. 3.5 HE agar: see A.5. 3.6 Xylose lysine deoxycholate (XLD) agar: see A.6. 3.7 Salmonella chromogenic medium. 3.8 Triple sugar iron (TSI) agar: see A.7. 3.9 Peptone water and indole reagent: see A.8. 3.10 Urea agar (pH 7.2): see A.9. 3.11 Potassium cyanide (KCN) medium: see A.10. 3.12 Lysine decarboxylase test medium: see A.11. 3.13 Sugar fermentation tube: see A.12. 3.14 O-Nitrophenyl-β-D-galactopyranoside (ONPG) medium: see A.13. 3.15 Semi-solid agar: see A.14. 3.16 Sodium malonate medium: see A.15. 3.17 Salmonella O, H and Vi diagnostic sera. 3.18 Biochemical identification kit. 4 Examination Procedure See Figure 1 for the examination procedure for Salmonella. Figure 1 Procedure for Salmonella Examination 5 Operation Procedure 5.1 Pre-enrichment Aseptically weigh 25g (mL) sample into sterile homogenizing cup or other appropriate container with 225mL BPW and homogenize at 8000r/min ~ 10000r/min for 1min ~ 2min, or into sterile homogenizing bag with 225 mL BPW and slap with slap type homogenizer for 1min ~ 2min. If sample is in liquid state, obviate homogenization and shake well. Adjust pH, if necessary, to 6.8 ± 0.2 with sterile 1mol/mL NaOH or HCl. Aseptically transfer the sample into conical flask (500mL) or other appropriate container (if the homogenizing cup is provided with nonporous cap, the sample may not be transferred). if homogenizing bag is used, incubate directly at 36℃ ± 1℃ for 8h ~ 18h. If product is frozen, thaw below 45℃ for at most 15min or thaw within 18h at 2℃ ~ 5℃. 5.2 Enrichment Shake the incubated sample mixture gently; take 1mL of the mixture into 10mL TTB; and incubate for 18h~24h at 42℃ ± 1℃. Meanwhile, take another 1mL of the mixture into 10mL SC; and incubate for 18h~24h at 36℃ ± 1℃. 5.3 Isolation Streak 3mm loopful broth on BS agar plate and XLD agar plate (or HE agar plate or Salmonella chromogenic medium), incubate 40h ~ 48h (for BS agar plate) or 18h ~ 24h (for XLD agar plate, HE agar plate and Salmonella chromogenic medium plate) at 36℃ ± 1℃. Examine plates for growth and characteristics of colony, see Table 1. Table 1 Colony Characteristics of Salmonella by Selective Agar Plate Selective agar plate Salmonella BS agar The colonies are black and have a metallic sheen, sepia or gray; and the culture medium around the colonies may appear in black or brown and that around some glaucous colonies of strains is unchanged. HE agar Green-blue or blue, and most colonies present black centers or are almost completely black; some strains are yellow and produce black center, or are almost completely black. XLD agar The colonies appear in pink with or without black centers. Some strains may present large lustrous black centers, or produce completely black colonies and some may produce yellow colonies with or without black centers. Salmonella chromogenic medium Determine according to the instructions of chromogenic medium. 5.4 Biochemical tests 5.4.1 Pick more than 2 typical or suspicious colonies from selective agar plate to inoculate triple sugar iron agar by streaking slant and stabbing butt. Directly inoculate lysine decarboxylase test medium and nutrient agar plate with non-sterile inoculating needle. Incubate for 18h ~ 24h or, if necessary, for 48h, at 36℃ ± 1℃.The reaction results of salmonella in triple sugar iron agar and lysine decarboxylase test medium are listed in Table 2.

Contents Foreword i 1 Scope 2 Apparatus and Materials 3 Culture Media and Reagents 4 Examination Procedure 5 Operation Procedure 6 Result and Report Appendix A Culture Media and Reagents Appendix B Common Salmonella Antigens

中華人民共和國國家標準 GB4789.4—2016 食品安全國家標準 食品微生物學檢驗 沙門氏菌檢驗 2016-12-23發布 2017-06-23實施 中華人民共和國國家衛生和計劃生育委員會 國家食品藥品監督管理總局 發布 前 言 本標準代替GB4789.4—2010《食品安全國家標準 食品微生物學檢驗 沙門氏菌檢驗》、SN0170—1992《出口食品沙門氏菌屬(包括亞利桑那菌)檢驗方法》、SN/T2552.5—2010《乳及乳制品衛生微生物學檢驗方法 第5部分:沙門氏菌檢驗》。 整合后的標準與GB4789.4—2010相比,主要變化如下: ——修改了檢測流程和血清學檢測操作程序; ——修改了附錄A 和附錄B。 食品安全國家標準 食品微生物學檢驗 沙門氏菌檢驗 1 范圍 本標準規定了食品中沙門氏菌(Salmonella)的檢驗方法。 本標準適用于食品中沙門氏菌的檢驗。 2 設備和材料 除微生物實驗室常規滅菌及培養設備外,其他設備和材料如下: 2.1 冰箱:2℃~5℃。 2.2 恒溫培養箱:36℃±1℃,42℃±1℃。 2.3 均質器。 2.4 振蕩器。 2.5 電子天平:感量0.1g。 2.6 無菌錐形瓶:容量500mL,250mL。 2.7 無菌吸管:1mL(具0.01mL刻度)、10mL(具0.1mL刻度)或微量移液器及吸頭。 2.8 無菌培養皿:直徑60mm,90mm。 2.9 無菌試管:3mm×50mm、10mm×75mm。 2.10 pH 計或pH 比色管或精密pH 試紙。 2.11 全自動微生物生化鑒定系統。 2.12 無菌毛細管。 3 培養基和試劑 3.1 緩沖蛋白胨水(BPW):見A.1。 3.2 四硫磺酸鈉煌綠(TTB)增菌液:見A.2。 3.3 亞硒酸鹽胱氨酸(SC)增菌液:見A.3。 3.4 亞硫酸鉍(BS)瓊脂:見A.4。 3.5 HE瓊脂:見A.5。 3.6 木糖賴氨酸脫氧膽鹽(XLD)瓊脂:見A.6。 3.7 沙門氏菌屬顯色培養基。 3.8 三糖鐵(TSI)瓊脂:見A.7。 3.9 蛋白胨水、靛基質試劑:見A.8。 3.10 尿素瓊脂(pH7.2):見A.9。 3.11 氰化鉀(KCN)培養基:見A.10。 3.12 賴氨酸脫羧酶試驗培養基:見A.11。 3.13 糖發酵管:見A.12。 3.14 鄰硝基酚β-D半乳糖苷(ONPG)培養基:見A.13。 3.15 半固體瓊脂:見A.14。 3.16 丙二酸鈉培養基:見A.15。 3.17 沙門氏菌O、H 和Vi診斷血清。 3.18 生化鑒定試劑盒。 4 檢驗程序 沙門氏菌檢驗程序見圖1。 樣品處理 25 g(mL)樣品+225 mE BPW XLD(或HE、顯色培養基) 挑取可疑菌落 TSI，賴氨酸，NA，靛基質，尿素(pH7.2)，KCN 生化鑒定試劑盒或全自動微生物生化鑒定系統+ H2S+靛基質尿素-KCN-賴氨酸+ H2S+靛基質+尿素-KCN-賴氨酸+ H2S-靛基質-尿素-KCN-賴氨酸+／- 反應結果與左側描述不符 甘露醇+、山梨醇+ 沙門氏菌 非沙門氏菌 多價血清鑒定 血清學分型(選做) 報告 圖1 沙門氏菌檢驗程序 5 操作步驟 5.1 預增菌 無菌操作稱取25g(mL)樣品,置于盛有225mLBPW 的無菌均質杯或合適容器內,以8000r/min~10000r/min均質1min~2min,或置于盛有225mLBPW 的無菌均質袋中,用拍擊式均質器拍打1min~2min。若樣品為液態,不需要均質,振蕩混勻。如需調整pH,用1mol/mL 無菌NaOH 或HCl調pH 至6.8±0.2。無菌操作將樣品轉至500mL錐形瓶或其他合適容器內(如均質杯本身具有無孔蓋,可不轉移樣品),如使用均質袋,可直接進行培養,于36℃±1℃培養8h~18h。 如為冷凍產品,應在45℃以下不超過15min,或2℃~5℃不超過18h解凍。 5.2 增菌 輕輕搖動培養過的樣品混合物,移取1mL,轉種于10mLTTB內,于42℃±1℃培養18h~24h。 同時,另取1mL,轉種于10mLSC內,于36℃±1℃培養18h~24h。 5.3 分離 分別用直徑3mm的接種環取增菌液1環,劃線接種于一個BS瓊脂平板和一個XLD瓊脂平板(或HE瓊脂平板或沙門氏菌屬顯色培養基平板),于36℃±1℃分別培養40h~48h(BS瓊脂平板)或18h~24h(XLD瓊脂平板、HE瓊脂平板、沙門氏菌屬顯色培養基平板),觀察各個平板上生長的菌落,各個平板上的菌落特征見表1。 表1 沙門氏菌屬在不同選擇性瓊脂平板上的菌落特征 選擇性瓊脂平板 沙門氏菌 BS瓊脂 菌落為黑色有金屬光澤、棕褐色或灰色,菌落周圍培養基可呈黑色或棕色;有些菌株形成灰綠色的菌落,周圍培養基不變 HE瓊脂 藍綠色或藍色,多數菌落中心黑色或幾乎全黑色;有些菌株為黃色,中心黑色或幾乎全黑色 XLD瓊脂 菌落呈粉紅色,帶或不帶黑色中心,有些菌株可呈現大的帶光澤的黑色中心,或呈現全部黑色的菌落;有些菌株為黃色菌落,帶或不帶黑色中心 沙門氏菌屬顯色培養基 按照顯色培養基的說明進行判定 5.4 生化試驗 5.4.1 自選擇性瓊脂平板上分別挑取2個以上典型或可疑菌落,接種三糖鐵瓊脂,先在斜面劃線,再于底層穿刺;接種針不要滅菌,直接接種賴氨酸脫羧酶試驗培養基和營養瓊脂平板,于36 ℃±1 ℃培養18h~24h,必要時可延長至48h。在三糖鐵瓊脂和賴氨酸脫羧酶試驗培養基內,沙門氏菌屬的反應結果見表2。 表2 沙門氏菌屬在三糖鐵瓊脂和賴氨酸脫羧酶試驗培養基內的反應結果 三糖鐵瓊脂 賴氨酸脫羧酶試驗培養基 初步判斷 斜面 底層 產氣 硫化氫 K A +(-) +(-) + 可疑沙門氏菌屬 K A +(-) +(-) - 可疑沙門氏菌屬 A A +(-) +(-) + 可疑沙門氏菌屬 A A +/- +/- - 非沙門氏菌 K K +/- +/- +/- 非沙門氏菌 注:K:產堿 ,A:產酸 ;+:陽性 ,-:陰性 ;+(-):多數陽性 ,少數陰性 ;+/-:陽性或陰性。 5.4.2 接種三糖鐵瓊脂和賴氨酸脫羧酶試驗培養基的同時,可直接接種蛋白胨水(供做靛基質試驗)、尿素瓊脂(pH7.2)、氰化鉀(KCN)培養基,也可在初步判斷結果后從營養瓊脂平板上挑取可疑菌落接種。于36℃±1℃培養18h~24h,必要時可延長至48h,按表3判定結果。將已挑菌落的平板儲存于2℃~5℃或室溫至少保留24h,以備必要時復查。 表3 沙門氏菌屬生化反應初步鑒別表 反應序號 硫化氫 (H2S) 靛基質 pH7.2尿素 氰化鉀 (KCN) 賴氨酸脫羧酶 A1 + - - - + A2 + + - - + A3 - - - - +/- 注:+陽性 ;-陰性 ;+/-陽性或陰性。 5.4.2.1 反應序號A1:典型反應判定為沙門氏菌屬。如尿素、KCN 和賴氨酸脫羧酶3項中有1項異常,按表4可判定為沙門氏菌。如有2項異常為非沙門氏菌。 表4 沙門氏菌屬生化反應初步鑒別表 pH7.2尿素 氰化鉀 (KCN) 賴氨酸脫羧酶 判定結果 - - - 甲型副傷寒沙門氏菌 (要求血清學鑒定結果 ) - + + 沙門氏菌 Ⅳ或 Ⅴ(要求符合本群生化特性 ) + - + 沙門氏菌個別變體 (要求血清學鑒定結果 ) 注:+表示陽性 ;-表示陰性。 5.4.2.2 反應序號A2:補做甘露醇和山梨醇試驗,沙門氏菌靛基質陽性變體兩項試驗結果均為陽性,但需要結合血清學鑒定結果進行判定。 5.4.2.3 反應序號A3:補做ONPG。ONPG 陰性為沙門氏菌,同時賴氨酸脫羧酶陽性,甲型副傷寒沙門氏菌為賴氨酸脫羧酶陰性。 5.4.2.4 必要時按表5進行沙門氏菌生化群的鑒別。 表5 沙門氏菌屬各生化群的鑒別 項目 Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅳ Ⅴ Ⅵ 衛矛醇 + + — — + — 山梨醇 + + + + + — 水楊苷 — — — + — — ONPG — — + — + — 丙二酸鹽 — + + — — — KCN — — — + + — 注:+表示陽性 ;—表示陰性。 5.4.3 如選擇生化鑒定試劑盒或全自動微生物生化鑒定系統,可根據5.4.1的初步判斷結果,從營養瓊脂平板上挑取可疑菌落,用生理鹽水制備成濁度適當的菌懸液,使用生化鑒定試劑盒或全自動微生物生化鑒定系統進行鑒定。 5.5 血清學鑒定 5.5.1 檢查培養物有無自凝性 一般采用1.2%~1.5%瓊脂培養物作為玻片凝集試驗用的抗原。首先排除自凝集反應,在潔凈的玻片上滴加一滴生理鹽水,將待試培養物混合于生理鹽水滴內,使成為均一性的混濁懸液,將玻片輕輕搖動30s~60s,在黑色背景下觀察反應(必要時用放大鏡觀察),若出現可見的菌體凝集,即認為有自凝性,反之無自凝性。對無自凝的培養物參照下面方法進行血清學鑒定。 5.5.2 多價菌體抗原(O)鑒定 在玻片上劃出2個約1cm×2cm 的區域,挑取1環待測菌,各放1/2環于玻片上的每一區域上部,在其中一個區域下部加1滴多價菌體(O)抗血清,在另一區域下部加入1滴生理鹽水,作為對照。再用無菌的接種環或針分別將兩個區域內的菌苔研成乳狀液。將玻片傾斜搖動混合1min,并對著黑暗背景進行觀察,任何程度的凝集現象皆為陽性反應。O 血清不凝集時,將菌株接種在瓊脂量較高的(如2%~3%)培養基上再檢查;如果是由于Vi抗原的存在而阻止了O 凝集反應時,可挑取菌苔于1mL生理鹽水中做成濃菌液,于酒精燈火焰上煮沸后再檢查。 5.5.3 多價鞭毛抗原(H)鑒定 操作同5.5.2。H 抗原發育不良時,將菌株接種在0.55%~0.65%半固體瓊脂平板的中央,待菌落蔓延生長時,在其邊緣部分取菌檢查;或將菌株通過接種裝有0.3%~0.4%半固體瓊脂的小玻管1次~2次,自遠端取菌培養后再檢查。 5.6 血清學分型(選做項目) 5.6.1 O 抗原的鑒定 用A~F多價O 血清做玻片凝集試驗,同時用生理鹽水做對照。在生理鹽水中自凝者為粗糙型菌株,不能分型。 被A~F多價O 血清凝集者,依次用O4;O3、O10;O7;O8;O9;O2和O11因子血清做凝集試驗。 根據試驗結果,判定O 群。被O3、O10血清凝集的菌株,再用O10、O15、O34、O19單因子血清做凝集試驗,判定E1、E4各亞群,每一個O 抗原成分的最后確定均應根據O 單因子血清的檢查結果,沒有O單因子血清的要用兩個O 復合因子血清進行核對。 不被A~F多價O 血清凝集者,先用9種多價O 血清檢查,如有其中一種血清凝集,則用這種血清所包括的O 群血清逐一檢查,以確定O 群。每種多價O 血清所包括的O 因子如下: O 多價1 A,B,C,D,E,F群(并包括6,14群) O 多價2 13,16,17,18,21群 O 多價3 28,30,35,38,39群 O 多價4 40,41,42,43群 O 多價5 44,45,47,48群 O 多價6 50,51,52,53群 O 多價7 55,56,57,58群 O 多價8 59,60,61,62群 O 多價9 63,65,66,67群 5.6.2 H 抗原的鑒定 屬于A~F各O 群的常見菌型,依次用表6所述H 因子血清檢查第1相和第2相的H 抗原。 表6 A~F群常見菌型 H 抗原表 O群 第1相 第2相 A B B C1 C2 D(不產氣的) D(產氣的) E1 E4 E4 a g,f,s i,b,d k,v,r,c b,d,r d g,m,p,q h,v g,s,t i 無 無 2 5,z15 2,5 無 無 6,w,x 無 不常見的菌型,先用8種多價H 血清檢查,如有其中一種或兩種血清凝集,則再用這一種或兩種血 清所包括的各種H 因子血清逐一檢查,以第1相和第2項的H 抗原。8種多價H 血清所包括的H 因 子如下: H 多價1 a,b,c,d,i H 多價2 eh,enx,enz15,fg,gms,gpu,gp,gq,mt,gz51 H 多價3 k,r,y,z,z10,lv,lw,lz13,lz28,lz40 H 多價4 1,2;1,5;1,6;1,7;z6 H 多價5 z4z23,z4z24,z4z32,z29,z35,z36,z38 H 多價6 z39,z41,z42,z44 H 多價7 z52,z53,z54,z55 H 多價8 z56,z57,z60,z61,z62 每一個H 抗原成分的最后確定均應根據H 單因子血清的檢查結果,沒有H 單因子血清的要用兩個H 復合因子血清進行核對。 檢出第1相H 抗原而未檢出第2相H 抗原的或檢出第2相H 抗原而未檢出第1相H 抗原的,可在瓊脂斜面上移種1代~2代后再檢查。如仍只檢出一個相的H 抗原,要用位相變異的方法檢查其另一個相。單相菌不必做位相變異檢查。 位相變異試驗方法如下: 簡易平板法:將0.35%~0.4%半固體瓊脂平板烘干表面水分,挑取因子血清1環,滴在半固體平板表面,放置片刻,待血清吸收到瓊脂內,在血清部位的中央點種待檢菌株,培養后,在形成蔓延生長的菌苔邊緣取菌檢查。 小玻管法:將半固體管(每管約1mL~2mL)在酒精燈上溶化并冷至50℃,取已知相的H 因子血清0.05mL~0.1mL,加入于溶化的半固體內,混勻后,用毛細吸管吸取分裝于供位相變異試驗的小玻管內,待凝固后,用接種針挑取待檢菌,接種于一端。將小玻管平放在平皿內,并在其旁放一團濕棉花,以防瓊脂中水分蒸發而干縮,每天檢查結果,待另一相細菌解離后,可以從另一端挑取細菌進行檢查。 培養基內血清的濃度應有適當的比例,過高時細菌不能生長,過低時同一相細菌的動力不能抑制。一般按原血清1∶200~1∶800的量加入。 小倒管法:將兩端開口的小玻管(下端開口要留一個缺口,不要平齊)放在半固體管內,小玻管的上端應高出于培養基的表面,滅菌后備用。臨用時在酒精燈上加熱溶化,冷至50℃,挑取因子血清1環,加入小套管中的半固體內,略加攪動,使其混勻,待凝固后,將待檢菌株接種于小套管中的半固體表層內,每天檢查結果,待另一相細菌解離后,可從套管外的半固體表面取菌檢查,或轉種1%軟瓊脂斜面,于36℃培養后再做凝集試驗。 5.6.3 Vi抗原的鑒定 用Vi因子血清檢查。已知具有Vi抗原的菌型有:傷寒沙門氏菌,丙型副傷寒沙門氏菌,都柏林沙門氏菌。 5.6.4 菌型的判定 根據血清學分型鑒定的結果,按照附錄B或有關沙門氏菌屬抗原表判定菌型。 6 結果與報告 綜合以上生化試驗和血清學鑒定的結果,報告25g(mL)樣品中檢出或未檢出沙門氏菌。 附 錄 A 培養基和試劑 A.1 緩沖蛋白胨水(BPW) A.1.1 成分 蛋白胨 10.0g 氯化鈉5.0g 磷酸氫二鈉(含12個結晶水) 9.0g 磷酸二氫鉀1.5g 蒸餾水1000mL A.1.2 制法 將各成分加入蒸餾水中,攪混均勻,靜置約10min,煮沸溶解,調節pH 至7.2±0.2,高壓滅菌121℃,15min。 A.2 四硫磺酸鈉煌綠(TTB)增菌液 A.2.1 基礎液 蛋白胨 10.0g 牛肉膏5.0g 氯化鈉3.0g 碳酸鈣45.0g 蒸餾水1000mL 除碳酸鈣外,將各成分加入蒸餾水中,煮沸溶解,再加入碳酸鈣,調節pH 至7.0±0.2,高壓滅菌121℃,20min。 A.2.2 硫代硫酸鈉溶液 硫代硫酸鈉(含5個結晶水) 50.0g 蒸餾水加至100mL 高壓滅菌121℃,20min。 A.2.3 碘溶液 碘 片20.0g 碘化鉀25.0g 蒸餾水加至100mL 將碘化鉀充分溶解于少量的蒸餾水中,再投入碘片,振搖玻瓶至碘片全部溶解為止,然后加蒸餾水至規定的總量,貯存于棕色瓶內,塞緊瓶蓋備用。 A.2.4 0.5%煌綠水溶液 煌綠0.5g 蒸餾水100mL 溶解后,存放暗處,不少于1d,使其自然滅菌。 A.2.5 牛膽鹽溶液 牛膽鹽 10.0g 蒸餾水100mL 加熱煮沸至完全溶解,高壓滅菌121℃,20min。 A.2.6 制法 基礎液 900mL 硫代硫酸鈉溶液100mL 碘溶液20.0mL 煌綠水溶液2.0mL 牛膽鹽溶液50.0mL 臨用前,按上列順序,以無菌操作依次加入基礎液中,每加入一種成分,均應搖勻后再加入另一種成分。 A.3 亞硒酸鹽胱氨酸(SC)增菌液 A.3.1 成分 蛋白胨 5.0g 乳糖4.0g 磷酸氫二鈉10.0g 亞硒酸氫鈉4.0g L-胱氨酸0.01g 蒸餾水1000mL A.3.2 制法 除亞硒酸氫鈉和L-胱氨酸外,將各成分加入蒸餾水中,煮沸溶解,冷至55℃以下,以無菌操作加入亞硒酸氫鈉和1g/LL-胱氨酸溶液10mL(稱取0.1gL-胱氨酸,加1mol/L氫氧化鈉溶液15mL,使溶解,再加無菌蒸餾水至100mL即成,如為DL-胱氨酸,用量應加倍)。搖勻,調節pH 至7.0±0.2。 A.4 亞硫酸鉍(BS)瓊脂 A.4.1 成分 蛋白胨 10.0g 牛肉膏5.0g 葡萄糖5.0g 硫酸亞鐵0.3g 磷酸氫二鈉4.0g 煌綠0.025g或5.0g/L水溶液5.0mL 檸檬酸鉍銨2.0g 亞硫酸鈉6.0g 瓊脂18.0g~20.0g 蒸餾水1000mL A.4.2 制法 將前三種成分加入300mL蒸餾水(制作基礎液),硫酸亞鐵和磷酸氫二鈉分別加入20mL和30mL蒸餾水中,檸檬酸鉍銨和亞硫酸鈉分別加入另一20mL和30mL蒸餾水中,瓊脂加入600mL蒸餾水中。然后分別攪拌均勻,煮沸溶解。冷至80℃左右時,先將硫酸亞鐵和磷酸氫二鈉混勻,倒入基礎液中,混勻。 將檸檬酸鉍銨和亞硫酸鈉混勻,倒入基礎液中,再混勻。調節pH 至7.5±0.2,隨即傾入瓊脂液中,混合均勻,冷至50℃~55℃。加入煌綠溶液,充分混勻后立即傾注平皿。 注:本培養基不需要高壓滅菌,在制備過程中不宜過分加熱,避免降低其選擇性,貯于室溫暗處,超過48h會降低其選擇性,本培養基宜于當天制備,第二天使用。 A.5 HE 瓊脂(Hektoen Enteric Agar) A.5.1 成分 蛋白胨 12.0g 牛肉膏3.0g 乳糖12.0g 蔗糖12.0g 水楊素2.0g 膽鹽20.0g 氯化鈉5.0g 瓊脂18.0g~20.0g 蒸餾水1000mL 0.4%溴麝香草酚藍溶液16.0mL Andrade指示劑20.0mL 甲液20.0mL 乙液20.0mL A.5.2 制法 將前面七種成分溶解于400mL蒸餾水內作為基礎液;將瓊脂加入于600mL蒸餾水內。然后分別攪拌均勻,煮沸溶解。加入甲液和乙液于基礎液內,調節pH 至7.5±0.2。再加入指示劑,并與瓊脂液合并,待冷至50℃~55℃傾注平皿。 注:①本培養基不需要高壓滅菌,在制備過程中不宜過分加熱,避免降低其選擇性。 ②甲液的配制 硫代硫酸鈉 34.0g 檸檬酸鐵銨4.0g 蒸餾水100mL ③乙液的配制 去氧膽酸鈉 10.0g 蒸餾水100mL ④Andrade 指示劑 酸性復紅 0.5g 1mol/L氫氧化鈉溶液16.0mL 蒸餾水100mL 將復紅溶解于蒸餾水中,加入氫氧化鈉溶液。數小時后如復紅褪色不全,再加氫氧化鈉溶液1mL~2mL。 A.6 木糖賴氨酸脫氧膽鹽(XLD)瓊脂 A.6.1 成分 酵母膏 3.0g L-賴氨酸5.0g 木糖3.75g 乳糖7.5g 蔗糖7.5g 去氧膽酸鈉2.5g 檸檬酸鐵銨0.8g 硫代硫酸鈉6.8g 氯化鈉5.0g 瓊脂15.0g 酚紅0.08g 蒸餾水1000mL A.6.2 制法 除酚紅和瓊脂外,將其他成分加入400mL蒸餾水中,煮沸溶解,調節pH 至7.4±0.2。另將瓊脂加入600mL蒸餾水中,煮沸溶解。 將上述兩溶液混合均勻后,再加入指示劑,待冷至50℃~55℃傾注平皿。 注:本培養基不需要高壓滅菌,在制備過程中不宜過分加熱,避免降低其選擇性,貯于室溫暗處。本培養基宜于當 天制備,第二天使用。 A.7 三糖鐵(TSI)瓊脂 A.7.1 成分 蛋白胨 20.0g 牛肉膏5.0g 乳糖10.0g 蔗糖10.0g 葡萄糖1.0g 硫酸亞鐵銨(含6個結晶水) 0.2g 酚紅0.025g或5.0g/L溶液5.0mL 氯化鈉5.0g 硫代硫酸鈉0.2g 瓊脂12.0g 蒸餾水1000mL A.7.2 制法 除酚紅和瓊脂外,將其他成分加入400mL蒸餾水中,煮沸溶解,調節pH 至7.4±0.2。另將瓊脂加入600mL蒸餾水中,煮沸溶解。 將上述兩溶液混合均勻后,再加入指示劑,混勻,分裝試管,每管約2mL~4mL,高壓滅菌121 ℃ 10min或115℃15min,滅菌后制成高層斜面,呈桔紅色。 A.8 蛋白胨水、靛基質試劑 A.8.1 蛋白胨水 蛋白胨(或胰蛋白胨) 20.0g 氯化鈉5.0g 蒸餾水1000mL 將上述成分加入蒸餾水中,煮沸溶解,調節pH 至7.4±0.2,分裝小試管,121℃高壓滅菌15min。 A.8.2 靛基質試劑 A.8.2.1 柯凡克試劑:將5g對二甲氨基甲醛溶解于75mL戊醇中,然后緩慢加入濃鹽酸25mL。 A.8.2.2 歐-波試劑:將1g對二甲氨基苯甲醛溶解于95 mL95% 乙醇內。然后緩慢加入濃鹽酸20mL。 A.8.3 試驗方法 挑取小量培養物接種,在36℃±1℃培養1d~2d,必要時可培養4d~5d。加入柯凡克試劑約0.5mL,輕搖試管,陽性者于試劑層呈深紅色;或加入歐-波試劑約0.5mL,沿管壁流下,覆蓋于培養液表面,陽性者于液面接觸處呈玫瑰紅色。 注:蛋白胨中應含有豐富的色氯酸。每批蛋白胨買來后,應先用已知菌種鑒定后方可使用。 A.9 尿素瓊脂(pH7.2) A.9.1 成分 蛋白胨 1.0g 氯化鈉5.0g 葡萄糖1.0g 磷酸二氫鉀2.0g 0.4%酚紅3.0mL 瓊脂20.0g 蒸餾水1000mL 20%尿素溶液100mL A.9.2 制法 除尿素、瓊脂和酚紅外,將其他成分加入400mL蒸餾水中,煮沸溶解,調節pH 至7.2±0.2。另將瓊脂加入600mL蒸餾水中,煮沸溶解。 將上述兩溶液混合均勻后,再加入指示劑后分裝,121 ℃高壓滅菌15min。冷至50 ℃~55 ℃,加入經除菌過濾的尿素溶液。尿素的最終濃度為2%。分裝于無菌試管內,放成斜面備用。 A.9.3 試驗方法 挑取瓊脂培養物接種,在36℃±1℃培養24h,觀察結果。尿素酶陽性者由于產堿而使培養基變為紅色。 A.10 氰化鉀(KCN)培養基 A.10.1 成分 蛋白胨 10.0g 氯化鈉5.0g 磷酸二氫鉀0.225g 磷酸氫二鈉5.64g 蒸餾水1000mL 0.5%氰化鉀20.0mL A.10.2 制法 將除氰化鉀以外的成分加入蒸餾水中,煮沸溶解,分裝后121 ℃高壓滅菌15min。放在冰箱內使其充分冷卻。每100mL培養基加入0.5%氰化鉀溶液2.0mL(最后濃度為1∶10000),分裝于無菌試管內,每管約4mL,立刻用無菌橡皮塞塞緊,放在4℃冰箱內,至少可保存兩個月。同時,將不加氰化鉀的培養基作為對照培養基,分裝試管備用。 A.10.3 試驗方法 將瓊脂培養物接種于蛋白胨水內成為稀釋菌液,挑取1環接種于氰化鉀(KCN)培養基。并另挑取1環接種于對照培養基。在36℃±1℃培養1d~2d,觀察結果。如有細菌生長即為陽性(不抑制),經2d細菌不生長為陰性(抑制)。 注:氰化鉀是劇毒藥,使用時應小心,切勿沾染,以免中毒。夏天分裝培養基應在冰箱內進行。試驗失敗的主要原因是封口不嚴,氰化鉀逐漸分解,產生氫氰酸氣體逸出,以致藥物濃度降低,細菌生長,因而造成假陽性反應。 試驗時對每一環節都要特別注意。 A.11 賴氨酸脫羧酶試驗培養基 A.11.1 成分 蛋白胨 5.0g 酵母浸膏3.0g 葡萄糖1.0g 蒸餾水1000mL 1.6%溴甲酚紫-乙醇溶液1.0mL L-賴氨酸或DL-賴氨酸0.5g/100mL或1.0g/100mL A.11.2 制法 除賴氨酸以外的成分加熱溶解后,分裝每瓶100mL,分別加入賴氨酸。L-賴氨酸按0.5%加入,DL-賴氨酸按1%加入。調節pH 至6.8±0.2。對照培養基不加賴氨酸。分裝于無菌的小試管內,每管0.5mL,上面滴加一層液體石蠟,115℃高壓滅菌10min。 A.11.3 試驗方法 從瓊脂斜面上挑取培養物接種,于36℃±1 ℃培養18h~24h,觀察結果。氨基酸脫羧酶陽性者由于產堿,培養基應呈紫色。陰性者無堿性產物,但因葡萄糖產酸而使培養基變為黃色。對照管應為黃色。 A.12 糖發酵管 A.12.1 成分 牛肉膏 5.0g 蛋白胨10.0g 氯化鈉3.0g 磷酸氫二鈉(含12個結晶水) 2.0g 0.2%溴麝香草酚藍溶液12.0mL 蒸餾水1000mL A.12.2 制法 A.12.2.1 葡萄糖發酵管按上述成分配好后,調節pH 至7.4±0.2。按0.5%加入葡萄糖,分裝于有一個倒置小管的小試管內,121℃高壓滅菌15min。 A.12.2.2 其他各種糖發酵管可按上述成分配好后,分裝每瓶100mL,121℃高壓滅菌15min。另將各種糖類分別配好10%溶液,同時高壓滅菌。將5mL糖溶液加入于100mL培養基內,以無菌操作分裝小試管。 注:蔗糖不純,加熱后會自行水解者,應采用過濾法除菌。 A.12.3 試驗方法 從瓊脂斜面上挑取小量培養物接種,于36℃±1℃培養,一般2d~3d。遲緩反應需觀察14d~30d。 A.13 鄰硝基酚β-D 半乳糖苷(ONPG)培養基 A.13.1 成分 鄰硝基酚β-D半乳糖苷(ONPG) (O-Nitrophenyl-β-D-galactopyranoside) 60.0mg 0.01mol/L磷酸鈉緩沖液(pH7.5) 10.0mL 1%蛋白胨水(pH7.5) 30.0mL A.13.2 制法 將ONPG溶于緩沖液內,加入蛋白胨水,以過濾法除菌,分裝于無菌的小試管內,每管0.5mL,用橡皮塞塞緊。 A.13.3 試驗方法 自瓊脂斜面上挑取培養物1滿環接種于36℃±1℃培養1h~3h和24h觀察結果。如果β-半乳糖苷酶產生,則于1h~3h變黃色,如無此酶則24h不變色。 A.14 半固體瓊脂 A.14.1 成分 牛肉膏 0.3g 蛋白胨1.0g 氯化鈉0.5g 瓊脂0.35g~0.4g 蒸餾水100mL A.14.2 制法 按以上成分配好,煮沸溶解,調節pH 至7.4±0.2。分裝小試管。121℃高壓滅菌15min。直立凝固備用。 注:供動力觀察、菌種保存、H 抗原位相變異試驗等用。 A.15 丙二酸鈉培養基 A.15.1 成分 酵母浸膏 1.0g 硫酸銨2.0g 磷酸氫二鉀0.6g 磷酸二氫鉀0.4g 氯化鈉2.0g 丙二酸鈉3.0g 0.2%溴麝香草酚藍溶液12.0mL 蒸餾水1000mL A.15.2 制法 除指示劑以外的成分溶解于水,調節pH 至6.8±0.2,再加入指示劑,分裝試管,121 ℃高壓滅菌15min。 A.15.3 試驗方法 用新鮮的瓊脂培養物接種,于36℃±1℃培養48h,觀察結果。陽性者由綠色變為藍色。 附 錄 B 常見沙門氏菌抗原 常見沙門氏菌抗原見表B.1。 表B.1 常見沙門氏菌抗原表 菌名 拉丁菌名 O抗原 H抗原 第1相 第2相 A群 甲型副傷寒沙門氏菌 S.ParatyphiA 1,2,12 a [1,5] B群 基桑加尼沙門氏菌 S.Kisangani 1,4,[5],12 a 1,2 阿雷查瓦萊塔沙門氏菌 S.Arechavaleta 4,[5],12 a 1,7 馬流產沙門氏菌 S.Abortusequi 4,12 — e,n,x 乙型副傷寒沙門氏菌 S.ParatyphiB 1,4,[5],12 b 1,2 利密特沙門氏菌 S.Limete 1,4,12,[27] b 1,5 阿邦尼沙門氏菌 S.Abony 1,4,[5],12,27 b e,n,x 維也納沙門氏菌 S.Wien 1,4,12,[27] b l,w 伯里沙門氏菌 S.Bury 4,12,[27] c z6 斯坦利沙門氏菌 S.Stanley 1,4,[5],12,[27] d 1,2 圣保羅沙門氏菌 S.Saintpaul 1,4,[5],12 e,h 1,2 里定沙門氏菌 S.Reading 1,4,[5],12 e,h 1,5 徹斯特沙門氏菌 S.Chester 1,4,[5],12 e,h e,n,x 德爾卑沙門氏菌 S.Derby 1,4,[5],12 f,g [1,2] 阿貢納沙門氏菌 S.Agona 1,4,[5],12 f,g,s [1,2] 埃森沙門氏菌 S.Essen 4,12 g,m — 加利福尼亞沙門氏菌 S.California 4,12 g,m,t [z67] 金斯敦沙門氏菌 S.Kingston 1,4,[5],12,[27] g,s,t [1,2] 布達佩斯沙門氏菌 S.Budapest 1,4,12,[27] g,t — 鼠傷寒沙門氏菌 S.Typhimurium 1,4,[5],12 i 1,2 拉古什沙門氏菌 S.Lagos 1,4,[5],12 i 1,5 布雷登尼沙門氏菌 S.Bredeney 1,4,12,[27] l,v 1,7 基爾瓦沙門氏菌Ⅱ S.KilwaⅡ 4,12 l,w e,n,x 海德爾堡沙門氏菌 S.Heidelberg 1,4,[15],12 r 1,2 印地安納沙門氏菌 S.Indiana 1,4,12 z 1,7 斯坦利維爾沙門氏菌 S.Stanleyville 1,4,[5],12,[27] z4,z23 [1,2] 伊圖里沙門氏菌 S.Ituri 1,4,12 z10 1,5 C1 群 奧斯陸沙門氏菌 S.Oslo 6,7,14 a e,n,x 愛丁保沙門氏菌 S.Edinburg 6,7,14 b 1,5 布隆方丹沙門氏菌Ⅱ S.BloemfonteinⅡ 6,7 b [e,n,x]:z42 丙型副傷寒沙門氏菌 S.ParatyphiC 6,7,[Vi] c 1,5 豬霍亂沙門氏菌 S.Choleraesuis 6,7 c 1,5 豬傷寒沙門氏菌 S.Typhisuis 6,7 c 1,5 羅米他沙門氏菌 S.Lomita 6,7 e,h 1,5 布倫登盧普沙門氏菌 S.Braenderup 6,7,14 e,h e,n,z15 里森沙門氏菌 S.Rissen 6,7,14 f,g — 蒙得維的亞沙門氏菌 S.Montevideo 6,7,14 g,m,[p],s [1,2,7] 里吉爾沙門氏菌 S.Riggil 6,7 g,[t] — 奧雷寧堡沙門氏菌 S.Oranieburg 6,7,14 m,t [2,5,7] 奧里塔蔓林沙門氏菌 S.Oritamerin 6,7 i 1,5 湯卜遜沙門氏菌 S.Thompson 6,7,14 k 1,5 康科德沙門氏菌 S.Concord 6,7 l,v 1,2 伊魯木沙門氏菌 S.Irumu 6,7 l,v 1,5 姆卡巴沙門氏菌 S.Mkamba 6,7 l,v 1,6 波恩沙門氏菌 S.Bonn 6,7 l,v e,n,x 波茨坦沙門氏菌 S.Potsdam 6,7,14 l,v e,n,z15 格但斯克沙門氏菌 S.Gdansk 6,7,14 l,v z6 維爾肖沙門氏菌 S.Virchow 6,7,14 r 1,2 嬰兒沙門氏菌 S.Infantis 6,7,14 r 1,5 巴布亞沙門氏菌 S.Papuana 6,7 r e,n,z15 巴累利沙門氏菌 S.Bareilly 6,7,14 y 1,5 哈特福德沙門氏菌 S.Hartford 6,7 y e,n,x 三河島沙門氏菌 S.Mikawasima 6,7,14 y e,n,z15 姆班達卡沙門氏菌 S.Mbandaka 6,7,14 z10 e,n,z15 田納西沙門氏菌 S.Tennessee 6,7,14 z29 [1,2,7] 布倫登盧普沙門氏菌 S.Braenderup 6,7,14 e,h e,n,z15 耶路撒冷沙門氏菌 S.Jerusalem 6,7,14 z10 l,w C2群 習志野沙門氏菌 S.Narashino 6.8 a e,n,x 名古屋沙門氏菌 S.Nagoya 6,8 b 1,5 加瓦尼沙門氏菌 S.Gatuni 6,8 b e,n,x 慕尼黑沙門氏菌 S.Muenchen 6,8 d 1,2 曼哈頓沙門氏菌 S.Manhattan 6,8 d 1,5 紐波特沙門氏菌 S.Newport 6,8,20 e,h 1,2 科特布斯沙門氏菌 S.Kottbus 6,8 e,h 1,5 茨昂威沙門氏菌 S.Tshiongwe 6,8 e,h e,n,z15 林登堡沙門氏菌 S.Lindenburg 6,8 i 1,2 塔科拉迪沙門氏菌 S.Takoradi 6,8 i 1,5 波那雷恩沙門氏菌 S.Bonariensis 6,8 i e,n,x 利齊菲爾德沙門氏菌 S.Litchfield 6,8 l,v 1,2 病牛沙門氏菌 S.Bovismorbificans 6,8,20 r,[i] 1,5 查理沙門氏菌 S.Chailey 6,8 z4,z23 e,n,z15 C3群 巴爾多沙門氏菌 S.Bardo 8 e,h 1,2 依麥克沙門氏菌 S.Emek 8,20 g,m,s — 肯塔基沙門氏菌 S.Kentucky 8,20 i z6 D群 仙臺沙門氏菌 S.Sendai 1,9,12 a 1,5 傷寒沙門氏菌 S.Typhi 9,12,[Vi] d — 塔西沙門氏菌 S.Tarshyne 9,12 d 1,6 伊斯特本沙門氏菌 S.Eastbourne 1,9,12 e,h 1,5 以色列沙門氏菌 S.Israel 9,12 e,h e,n,z15 腸炎沙門氏菌 S.Enteritidis 1,9,12 g,m [1,7] 布利丹沙門氏菌 S.Blegdam 9,12 g,m,q — 沙門氏菌Ⅱ SalmonellaⅡ 1,9,12 g,m,[s],t [1,5,7] 都柏林沙門氏菌 S.Dublin 1,9,12,[Vi] g,p — 芙蓉沙門氏菌 S.Seremban 9,12 i 1,5 巴拿馬沙門氏菌 S.Panama 1,9,12 l,v 1,5 戈丁根沙門氏菌 S.Goettingen 9,12 l,v e,n,z15 爪哇安納沙門氏菌 S.Javiana 1,9,12 L,z28 1,5 雞-雛沙門氏菌 S.Gallinarum-Pullorum 1,9,12 — — E1群 奧凱福科沙門氏菌 S.Okefoko 3,10 c z6 瓦伊勒沙門氏菌 S.Vejle 3,{10},{15} e,h 1,2 明斯特沙門氏菌 S.Muenster 3,{10}{15}{15,34} e,h 1,5 鴨沙門氏菌 S.Anatum 3,{10}{15}{15,34} e,h 1,6 紐蘭沙門氏菌 S.Newlands 3,{10},{15,34} e,h e,n,x 火雞沙門氏菌 S.Meleagridis 3,{10}{15}{15,34} e,h l,w 雷根特沙門氏菌 S.Regent 3,10 f,g,[s] [1,6] 西翰普頓沙門氏菌 S.Westhampton 3,{10}{15}{15,34} g,s,t — 阿姆德爾尼斯沙門氏菌 S.Amounderness 3,10 i 1,5 新羅歇爾沙門氏菌 S.New-Rochelle 3,10 k l,w 恩昌加沙門氏菌 S.Nchanga 3,{10}{15} l,v 1,2 新斯托夫沙門氏菌 S.Sinstorf 3,10 l,v 1,5 倫敦沙門氏菌 S.London 3,{10}{15} l,v 1,6 吉韋沙門氏菌 S.Give 3,{10}{15}{15,34} l,v 1,7 魯齊齊沙門氏菌 S.Ruzizi 3,10 l,v e,n,z15 烏干達沙門氏菌 S.Uganda 3,{10}{15} l,z13 1,5 烏蓋利沙門氏菌 S.Ughelli 3,10 r 1,5 韋太夫雷登沙門氏菌 S.Weltevreden 3,{10}{15} r z6 克勒肯威爾沙門氏菌 S.Clerkenwell 3,10 z l,w 列克星敦沙門氏菌 S.Lexington 3,{10}{15}{15,34} z10 1,5 E4群 薩奧沙門氏菌 S.Sao 1,3,19 e,h e,n,z15 卡拉巴爾沙門氏菌 S.Calabar 1,3,19 e,h l,w 山夫登堡沙門氏菌 S.Senftenberg 1,3,19 g,[s],t — 斯特拉特福沙門氏菌 S.Stratford 1,3,19 i 1,2 塔克松尼沙門氏菌 S.Taksony 1,3,19 i z6 索恩保沙門氏菌 S.Schoeneberg 1,3,19 z e,n,z15 F群 昌丹斯沙門氏菌 S.Chandans 11 d [e,n,x] 阿柏丁沙門氏菌 S.Aberdeen 11 i 1,2 布里赫姆沙門氏菌 S.Brijbhumi 11 i 1,5 威尼斯沙門氏菌 S.Veneziana 11 i e,n,x 阿巴特圖巴沙門氏菌 S.Abaetetuba 11 k 1,5 魯比斯勞沙門氏菌 S.Rubislaw 11 r e,n,x 其他群 浦那沙門氏菌 S.Poona 1,13,22 z 1,6 里特沙門氏菌 S.Ried 1,13,22 z4,z23 [e,n,z15] 密西西比沙門氏菌 S.Mississippi 1,13,23 b 1,5 古巴沙門氏菌 S.Cubana 1,13,23 z29 — 蘇拉特沙門氏菌 S.Surat [1],6,14,[25] r,[i] e,n,z15 松茲瓦爾沙門氏菌 S.Sundsvall [1],6,14,[25] z e,n,x 非丁伏斯沙門氏菌 S.Hvittingfoss 16 b e,n,x 威斯敦沙門氏菌 S.Weston 16 e,h z6 上海沙門氏菌 S.Shanghai 16 l,v 1,6 自貢沙門氏菌 S.Zigong 16 l,w 1,5 巴圭達沙門氏菌 S.Baguida 21 z4,z23 — 迪尤波爾沙門氏菌 S.Dieuoppeul 28 i 1,7 盧肯瓦爾德沙門氏菌 S.Luckenwalde 28 z10 e,n,z15 拉馬特根沙門氏菌 S.Ramatgan 30 k 1,5 阿德萊沙門氏菌 S.Adelaide 35 f,g — 旺茲沃思沙門氏菌 S.Wandsworth 39 b 1,2 雷俄格倫德沙門氏菌 S.Riogrande 40 b 1,5 萊瑟沙門氏菌 S.LetheⅡ 41 g,t — 達萊姆沙門氏菌 S.Dahlem 48 k e,n,z15 沙門氏菌Ⅲb SalmonellaⅢb 61 l,v 1,5,7 注:關于表內符號的說明: {}={}內O 因子具有排他性。在血清型中{}內的因子不能與其他{}內的因子同時存在,例如在O∶3,10群中當菌株產生O∶15或O∶15,34因子時它替代了O∶10因子。 []= O(無下劃線)或H 因子的存在或不存在與噬菌體轉化無關,例如O∶4群中的[5]因子。H 因子在[]內時表示在野生菌株中罕見,例如極大多數S.ParatyphiA具有一個位相(a),罕有第2相(1,5)菌株。因此,用1,2,12∶a∶[1,5]表示。 _=下劃線時表示該O 因子是由噬菌體溶原化產生的。